(2)传统的氨基酸测序原理是 Edman化学降解法,近年来又发展了电喷射串联质谱法测定氨基酸的序列,分别描述它们的原理和特点

(3)什么是抗原和抗体?什么是单克隆抗体和多克隆抗体?基于抗体和抗原相互作用的用的生化分析方法有酶联免疫吸附侧定( ELISA)、免疫印记测定( Westerm Blot)及杭体芯片等,描述其中一种的作用原理。

(4)双向电泳进行蛋白质分离的原理,利用这项分离技术设计研究实验,写出实验的目的、方法及步骤,并列出所需要的其他仪器、药品、研究工具等。

实验步骤1:取20kg新鲜牛的心脏,置于冰上,使用含有0.2M蔗糖,pH为7.2的缓冲液,匀浆(均质化)

问题(1)为什么要用心脏组织?并且为什么选用如此大量的组织？

问题(2)在整个过程中为什么必须使组织始终保持低温?为什么需要给出pH在7.2左右？

题(3)下一步通过什么实验手段能够获得较纯的组织细胞中的线粒体组分?

问题(4)纯化的线粒体通过渗透压裂解后,样品中含有线粒体膜和线粒体内含物。如何使得蛋白质从样品中淀下来?解释相应原理。

实验步骤2:沉淀经溶解和透析后,进行分子量排阻层析分离。通过280nm紫外吸收收集各个分离的组分。

问题(5)为什么使用280m进行测定?第一个和最后一个组分所含蛋白质的分子特征是什么?

实验步骤3:将上一步收集的组分进行离子交换层析分离。

问题(6)实验步骤3的蛋白质分离的原理是什么?

实验步骤4:为了获得能够测序(氨基酸)的高纯度的蛋白质并且进一步特征分析,需要使用双向电泳进行分离纯化。

问题(7)描述双向电泳的纯化原理。

Arg、Phe、Ala、Tyr、Ser。此肽未经糜蛋白酶处理时,与FDNB反应不产生aDNP氨基酸。经糜蛋白酶作用后,此肽断裂成两个肽段,其氨基酸组成分别为Ala、

Tyr、Ser和Gly、Phe、Lys、Ara。这两个肽段分别与

FDNB反应,可分别产生 DNP-Ser和 DNP-Lys。此肽与胰蛋白酶反应,同样能生成两个肽段,它们的氨基酸组成分别是Arg、Gly和Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala。试问此七肽的一级结构是怎样的?给出分析过程。

(2)将400m的丙氨酸溶液调到pH=8.0,然后向该溶液中加入过量的甲醛,所得的溶液用NaOH反滴定到pH=8.0,消耗0.2moL的NaOH溶液250ml。问:在起始的溶液中丙氨酸为多少克(丙氨酸的分子量按89计)?

①相对分子质量为49500

②等电点为42

③具有磷酸水解酶活性,最适pH值为8.0

④在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体。

请为该蛋白质设计一套有效的纯化方案。要求:

1)纯化方案开始于收集菌体,终止于蛋白质X的鉴定,实验分步进行

2)充分利用己知条件

3)解释每一步操作的理由。

(2)说明SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳的原理、方法及应用。

(3)简述蛋白质功能的多样性。